AH109 Chemically Competent Cell

酵母菌化學感受態細胞

溫馨提示

見我司整理的酵母雙雜交（Yeast two-hybrid assay）產品專題。

產品標簽

Matchmarker GAL4雙雜交系統；Y2HGold；pGBKT7；Y187；pGADT7；AUR1-C；Aureobasidin A （AbA）；金擔子素；

產品信息

產品包裝

產品描述

AH109是GAL4系統酵母雙雜交用實驗菌株，來源于PJ69-2A酵母菌株，引入lacZ報告基因從而產生AH109。

AH109是MATa型，能直接轉化質粒或與MATα型酵母菌株Y187通過接合（mating）操作進行蛋白相互作用驗證或雙雜交文庫篩選和構建。AH109-GAL4酵母雙雜交系統需要兩種質粒配套使用，分別為pGBKT7和pGADT7。前者篩選標志為Trp，用于表達DNA-BD與誘餌蛋白（bait）的融合蛋白；后者篩選標志為Leu，用于表達AD與誘捕蛋白（prey）的融合蛋白。AH109有四個報告基因：lacZ，HIS3, ADE2, MEL1，分別由三個*異源的Gal4反應啟動元件-G1，G2，M1調控，這三種啟動子只有GAL4識別的17bp核心區相同，其余部分都不同。這一特征有效縮減假陽性發生的概率。因為，任何誘捕蛋白單獨結合引起假陽性都需要識別3個不同序列，激活4個報告基因表達。

本品為經特殊工藝制備的AH109酵母菌化學感受態細胞，用pGADT7質粒檢測轉化效率＞10⁴cfu/μg DNA。且在-80℃能穩定保存三個月。

基因型

MATa, trp1-901, leu2-3, 112, ura3-52, his3-200, gal4Δ, gal80Δ, LYS2::GAL1_UAS^-Gal1_TATA^-His3, MEL1GAL2_UAS^- Gal2_TATA^-Ade2, URA3::MEL1_UAS^-MEL1_TATA- lacZ

注意事項

1/在冰上融化感受態細胞。

2/轉化高濃度質粒可相應減少用于涂板的菌量。同時轉化2-3種質粒可適當增加質粒的用量。

3/AH109對高溫敏感，zui適生長溫度為27-30℃，一旦高于31℃，生長速度和轉化率都呈指數下降。

4/菌落變粉紅色并不是污染，而是酵母細胞生長中的一種常見現象。當酵母細胞在平板上培養幾天，將平板內的腺嘌呤消耗殆盡，那時酵母試圖通過自身代謝途徑合成腺嘌呤以供利用。然而，某些菌株ADE2基因被破壞，腺嘌呤合成受阻。且ADE4，5，6，7，8基因均正常。由此，造成中間產物P-ribosylamino imidazole（AIR）在細胞的積累使得菌落變為粉紅色。

5/酵母菌在缺陷培養基上生長速度比YPDA培養基慢，營養缺陷成分越多，生長越慢，以轉化涂板為例：涂YPDA平板于29℃，48h培養可見直徑1mm克隆；涂SD單缺平板于29℃，48-60h培養可見直徑1mm克隆；涂SD雙缺平板于29℃，60-80h培養可見直徑1mm克隆；涂SD三缺或四缺平板于29℃，80-90h培養可見直徑1mm克隆；

6/為了您的安全和健康，請穿實驗服并戴一次性手套操作。

相關產品

 — —Written/Edited by V. Shallan【版權歸MKBio懋康所有】

上海懋康生物科技有限公司是一家涉足于生命科學和生物技術領域研究的試劑、儀器和實驗室消耗品與實驗服務工作，主要從事細胞生物學、植物學、分子生物學、免疫學、生物化學、蛋白組學。生物制藥與診斷試劑研發生產等領域。 本公司秉承“以人為本，以誠為信、合同守信”的經營理念。堅持"品質保障"的原則為廣大客戶提供優質產品。

AH109 Chemically Competent Cell 酵母感受態細胞 克隆與表達分析

AH109 Chemically Competent Cell 酵母感受態細胞 克隆與表達分析