Plant Protoplast Transformation Kit (PEG-Mediated)

植物原生質體轉化試劑盒（PEG法）

產品關鍵詞：

Plant Protoplast 植物原生質體；PEG-mediated protoplast transformation 聚乙二醇介導的原生質體轉化；Yakult Honsha；Cellulase R-10 纖維素酶R-10；Macerozyme R-10 離析酶R-10；二乙酸熒光素 (FDA) 原生質體活力檢測；

產品信息

【溫馨提示】：見我司（MKBio）整理的植物細胞壁降解酶/消化酶產品專題。

產品描述

原生質體（Protoplast）是指植物細胞去掉細胞壁后的裸露部分，體外培養條件下，具有以下功能：1）具全能型，可再生細胞壁，進行連續的細胞分裂且能再生成完整植株的能力；2）具攝取外源大分子、細胞器，以及細菌、病毒的能力，從而原生質體是進行遺傳操作，基因轉移的良好材料；3）通過同種和異種植物的原生質體融合，可產生異核體，實現體細胞雜交，從而培育出具有抗病原或更高產量的新品種。

原生質體（Protoplast）的制備主流的技術是酶解法，因其具有消化溫柔，操作簡單，且良好維持原生質體完整性的特點。工作原理是根據植物細胞壁的結構特征選擇合適的酶進行處理，植物細胞壁主要由多糖（纖維素、半纖維素、果膠等）以及少量的蛋白和脂質構成。因此，通過使用纖維素酶、離析酶、半纖維素酶、果膠酶等復合酶來降解細胞壁，即可得到原生質體。

原生質體（Protoplast）的轉化方法很多，主要有PEG介導轉化法、電機穿孔轉化法、脂質體介導轉化法、農桿菌共培養轉化法等。

本試劑盒是PEG介導的原生質體轉化法，操作簡單和便捷。試劑盒含有植物原生質體制備（不包含消化酶）和植物轉化需要的所有試劑，按照單次10ml酶液體系來算，可做20次。

試劑盒組分

注意事項

為了您的安全和健康，請穿實驗服并戴一次性手套操作。

使用方法

• 需要準備材料
  • 離析酶R-10（比如，Cat#：MX7351-1G, MKBio）
  • 纖維素酶R-10（比如，Cat#：MX7352-1G, MKBio）
  • 70μm細胞篩網（比如，Cat#：352350, BD Bioscience）
  • 平頭鑷子
  • 一次性刀片
  • 1.5ml離心管
  • 50ml離心管
  • 恒溫加熱水浴鍋

• 原生質體分離

2.1 按照以下表格體系，配制即用型酶溶液：【注意：此溶液現配現用】

2.2 取生長狀態良好的葉片切成0.5-1mm的小條，按照20個葉片加10ml即用型酶溶液的比例迅速將切好的葉片小條浸泡于即用型酶溶液內，室溫避光酶解3h。

【注意】：酶解時間與葉片類型、葉片生長狀態有關，請根據實際實驗進行調整。酶溶液變為綠色表明原生質體已經分離，顯微鏡鏡檢確定是否分離。

2.3 酶解后加入10ml溶液B，輕柔混勻。

2.4 用70μm細胞篩網過濾步驟2.3獲得的溶液，去除未消化的葉片和雜質，收集濾液到50ml離心管內。

2.5 濾液于100×g，室溫離心2min，吸掉上清。

2.6 加1ml溶液B重懸原生質體，冰浴30min，使得原生質體自然沉淀到底部。

2.7 小心吸掉上清，不要觸動原生質體沉淀。將沉淀重懸于1ml溶液C，即得到原生質體溶液。

• 原生質體轉化
• 原生質體培養和收集

 — —Written/Edited by V. Shallan【版權歸MKBio懋康所有】

上海懋康生物科技有限公司是一家涉足于生命科學和生物技術領域研究的試劑、儀器和實驗室消耗品與實驗服務工作，主要從事細胞生物學、植物學、分子生物學、免疫學、生物化學、蛋白組學。生物制藥與診斷試劑研發生產等領域。 本公司秉承“以人為本，以誠為信、合同守信”的經營理念。堅持"品質保障"的原則為廣大客戶提供優質產品。

植物原生質體轉化試劑盒  植物細胞培養

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